Микроскопия ликвора

Микроскопия ликвора

Физические свойства

К физическим свойствам ликвора относятся цвет, прозрачность, относительная плотность, наличие фибринозной пленки.

Цвет. В норме ликвор бесцветен, как вода. При патологии он может приобретать красный или желтый цвет. Красный цвет ЦСЖ зависит от наличия в ней крови, что может быть при свежем кровоизлиянии в субарахноидальное пространство, травме мозга, а также при случайном ранении сосудов во время пункции. Случайную примесь крови от кровоизлияния отличают при помощи центрифугирования спинномозговой жидкости. При случайной примеси крови надосадочная жидкость бесцветна, а при кровоизлияниях имеет красный или бурый цвет.

Желтый цвет ликвора называется ксантохромия [от греч. хanthosжелтый + chroma цвет].Различают геморрагическую и застойную ксантохромию. Геморрагическая ксантохромия встречается при старых субарахноидальных кровоизлияниях и обусловлена наличием в ликворе билирубина, который образовался при распаде гемоглобина эритроцитов. Застойная ксантохромия является результатом замедления тока крови в сосудах мозга, что сопровождается усиленным пропотеванием плазмы крови, имеющей желтый цвет, в спинномозговую жидкость.

Прозрачность.В норме ликвор абсолютно прозрачен. Его мутность может быть обусловлена большим количеством клеточных элементов (лейкоцитов, эритроцитов) или присутствием микроорганизмов. Мутность, обусловленная форменными элементами крови, после центрифугирования исчезает, а зависящая от микроорганизмов остается. Легкая опалесценция ликвора наблюдается также при содержании в нем большого количества фибриногена.

Фибринозная пленка появляется при стоянии спинномозговой жидкости, содержащей очень большое количество фибриногена, что часто встречается при туберкулезном и серозном менингитах. Фибринозной пленкой называют полупрозрачное сплетение нитей фибрина, опускающееся в виде конуса от поверхности к дну пробирки. Чтобы не пропустить наличие фибринозной пленки, спинномозговую жидкость собирают в 2 пробирки: из одной делают все анализы, а другую оставляют стоять, предохраняя от сотрясений, на 1 сутки для образования фибринозной пленки.

Относительная плотность ликвора в норме составляет 1,003-1,008.

Микроскопическое исследование ЦСЖ предусматривает определение цитоза, то есть количества лейкоцитов в единице объема и дифференциацию клеточных элементов. Микроскопию следует проводить как можно скорее после взятия жидкости (в течение 30минут), так как клетки в ней быстро разрушаются.

Подсчет цитоза производится аналогично счету клеток крови в счетной камере. Но поскольку клеток в ликворе значительно меньше, для их счета пользуются камерой большего объема – Фукса-Розенталя (емкость 3,2мкл). По этой же причине жидкость не разводят, а только добавляют к ней 1/10 объема краски для разрушения эритроцитов и подкрашивания клеточных ядер.

Унифицированный метод подсчета количества форменных элементов в ликворе

Принцип. Подсчитывают количество лейкоцитов в счетной камере Фукса-Розенталя после разрушения эритроцитов.

Реактив: 10% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиловым фиолетовым (ледяная уксусная кислота 5мл, вода до 50мл + метиловый фиолетовый 0,1мл).

Специальное оборудование: микроскоп, камера Фукса-Розенталя, смесители для подсчета лейкоцитов (меланжеры).

Ход исследования. В меланжер (смеситель) для лейкоцитов набирают раствор уксусной кислоты до метки «I», затем до метки «II» набирают ЦСЖ. Раствор уксусной кислоты разрушает эритроциты, а метиловый фиолетовый подкрашивает лейкоциты в синий цвет, что облегчает их подсчет. Встряхивают меланжер, перемешивая содержимое. Предварительно выпустив первую каплю, заполняют содержимым меланжера счетную камеру Фукса-Розенталя и считают лейкоциты по всей сетке (в 256 квадратах) при малом увеличении микроскопа (окуляр 15 Х, объектив 8Х).

Расчет количества лейкоцитов в 1мкл ведется по формуле:

Х = , где А – количество подсчитанных лейкоцитов в камере Фукса-Розенталя.

Примечание. При отсутствии смесителя допускается смешивание ликвора с реактивом на часовом стекле: 10 капель ликвора и 1 капля реактива. После тщательного перемешивания полученной смесью заполняют камеру.

Подсчитывать количество форменных элементов в ликворе можно также с реактивом Самсона, который красит медленнее – 10-15 минут, но дает более отчетливую картину. Состав реактива Самсона: фуксин (спиртовой раствор 1:10) 2,5мл; ледяная уксусная кислота 30,0мл; карболовая кислота 2,0г; вода дистиллированная до 100мл. Ход исследования и расчет, как в унифицированном методе.

Цитоз в норме. Содержание лейкоцитов в ЦСЖ, полученной при люмбальной пункции, в норме составляет 0-5 клеток в 1мкл, или 0-5·10 6 /л. Цитоз ликвора из желудочков мозга0-1/мкл. У детей цитоз выше, чем у взрослых. С возрастом он постепенно падает.

Читайте также:  Чихуа хуа хуа мини фото

Клиническое значение. Увеличение количества клеточных элементов в ЦСЖ (плеоцитоз) наблюдается при воспалительных процессах мозговых оболочек и органических поражениях вещества мозга (опухоли, абсцесс, сифилис), а также при травмах, кровоизлияниях и др. Максимальный плеоцитоз – до 2000-5000·10 6 /л бывает при гнойном менингите и абсцессе мозга.

Количество эритроцитов в ликворе подсчитывают в счетной камере Горяева так же, как в крови. Для этого ЦСЖ с примесью крови разводят в 10 раз 0,9% раствором хлорида натрия (0,2мл раствора + 0,02мл ликвора). Количество эритроцитов в 1мкл ЦСЖ определяют, умножая число эритроцитов, подсчитанных в пяти больших квадратах камеры Горяева, на 500. Эритроциты могут быть обнаружены и в прозрачной бесцветной жидкости – при содержании менее 700 эритроцитов в 1мкл спинномозговой жидкости её цвет не меняется. 900-1000 эритроцитов в 1мкл придают жидкости опалесценцию; при наличии 2000 эритроцитов появляется едва заметное розовое окрашивание; при наличии 4000-5000 эритроцитов жидкость приобретает явно красный цвет. Для диагностики внутричерепного кровотечения имеет значение не только количество эритроцитов, но и нарастание их числа при повторном исследовании спинномозговой жидкости.

Дифференциация клеточных элементов в ликворе может проводиться:

– в счетной камере одновременно с подсчетом цитоза;

– в препаратах, окрашенных по Розиной, Возной, Алексееву.

В практической работе чаще используют первый метод.

Дата добавления: 2014-11-29 ; Просмотров: 2585 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

2.4.1. Макроскопическое исследование

Макроскопическое исследование – это вся информация о биоматериале, которую лаборант может получить при помощи органов чувств.

Цвет – в норме спинномозговая жидкость бесцветна и по виду не отличается от воды. Цвет ее определяют, сравнивая пробирку с материалом с такой же пробиркой, заполненной водой на белом фоне. Он может изменять при различных патологических процессах:

красный – примесь неизмененных эритроцитов (эритроцитархия). Определить ее можно при помощи тест-полосок (ГемоФАН), которые имеют 2 шкалы сравнения: одна из них меняет цвет при наличии интактных эритроцитов, другая – при наличии свободного гемоглобина в ликворе;

ксантохромный (желтый, желто-коричневый, розовый, коричневый) окрас возникает в присутствии оксигемоглобина, метгемоглобина и билирубина;

розовый цвет ликвору придает оксигемоглобин, освободившийся из лизированных эритроцитов;

желтый цвет обусловлен высоким содержанием билирубина, который образуется из гемоглобина. Для определения билирубинархии и ее выраженности используют тест-полоски (ИктоФАН), их реагентная зона меняет цвет от бледно-розового до насыщенного розового в зависимости от концентрации билирубина;

коричневый цвет ликвору придают метгемоглобин и метальбумин, они появляются при наличии инкапсулированных гематом и геморрагий в ЦНС;

зеленая окраска возникает при выраженной билирубинархии, так как происходит переход билирубина в биливердин – пигмент оливкового цвета. Иногда она обусловлена примесью гноя.

Прозрачность – в норме спинномозговая жидкость прозрачная, определяют этот параметр, сравнивая полученный материал с дистиллированной водой. Легкое помутнение ликвора наблюдается при лейкоцитозе свыше 200х10 6 /л, содержания эритроцитов более 400х10 6 /л, общего белка – более 3 г/л. Если после центрифугирования спинномозговая жидкость становится прозрачной, то мутность ее обусловлена форменными элементами, если остается мутной – микроорганизмами. Опалесценция ликвора возникает при высокой концентрации фибриногена.

Фибринозная пленка – в норме в спинномозговой жидкости низкое содержание фибрина и пленка при отстаивании не образуется. Высокое содержание фибрина дает нежную сеточку или пленку на стенках пробирки, мешочек или желеобразный сгусток. Ликвор, содержащий большое количество грубодисперсных белков сразу после выпускания свертывается в виде желеобразного сгустка.

2.4.2. Микроскопическое исследование ликвора

Это один из самых ответственных этапов исследования спинномозговой жидкости, на основании данных которого нередко подтверждаются либо опровергаются диагнозы.

Подсчет количества форменных элементов проводится в течении 30 минут после извлечения спинномозговой жидкости с последующей дифференциацией клеток. Для подсчета лейкоцитов препарат окрашивают одним из реактивов:

Читайте также:  Аналоги олаплекс

5 мл 10% раствор ледяной уксусной кислоты + 0,1 метилового фиолетового + вода до 50 мл – время окрашивания 2 минуты;

Реактив Самсона: 2,5 мл спиртового раствора фуксина 1:10 + 30 мл уксусной кислоты + 2 г карболовой кислоты + дистиллированной воды до 100 мл, время окрашивания 10-15 минут.

Окрашенный препарат помещают в камеру Фукса-Розенталя объемом 3,2 мкл. Лейкоциты считают на малом увеличении во всех 256 квадратах, при высоком плеоцитозе 200-1000х10 6 /л считают половину сетки и результат умножают на 2, при плеоцитозе свыше 1000х10 6 /л подсчитывают один ряд больших квадратов и результат умножают на 4. Нормальные значения цитоза указаны в таблице 1, при различных видах патологии – в таблице 2.

Изучение клеточного состава спинномозговой жидкости имеет важное значение при диагностике патологических процессов в центральной нервной системе. Изучение цитологического состава ликвора позволяет выделить следующие клеточные формы: лимфоциты, плазматические клетки, мононуклеарные фагоциты, нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, тучные клетки, клетки эпендимы, сосудистого сплетения желудочков, атипичные клетки, опухолевые клетки.

Для получения точного результата необходимо подсчитать клетки в течении 30 мин после извлечения спинномозговой жидкости. Установлено, что распад лейкоцитов и эритроцитов происходит вследствие низкой концентрации белков, которые оказывают стабилизирующее действие на клеточные мембраны.

Подсчет клеточных элементов можно производить в нативном или обработанном ликворе с помощью камеры Фукса-Розенталя. Определение цитоза в ликворе обычно производят, предварительно разведя его реактивом Самсона в 10 раз. Реактив Самсона готовят из 30 мл ледяной уксусной кислоты, 2,5мл спиртового раствора фуксина (1:10) и 2г фенола, доводят дистиллированной водой до 100 мл. Реактив стоек и позволяет сохранять клетки без изменения в течении нескольких часов. Уксусная кислота растворяет эритроциты, а фуксин окрашивает ядра лейкоцитов в красноватый цвет, что облегчает подсчет и дифференцировку клеток.

Лейкоциты считают в 16 больших (256 маленьких) квадратах камеры Фукса-Розенталя. Полученный результат делят на объем камеры – 3,2 мкл, определяя, таким образом ,количество клеток в 1 мкл и умножают на степень разведения ликвора – 10.

Для пересчета результата в единицы СИ (клетки/л) умножают на 106.

В норме в 1 мкл цереброспинальной жидкости обнаруживается 0 -5,0 лимфоцитов или 0-5,0. 106/л. У детей цитоз может быть несколько выше: до 3-х мес 20-23 кл в мкл, к 1 году – 14 -15 кл в мкл, к 10 годам – 4 -5 кл в мкл ликвора.

Увеличение числа клеток в спинномозговой жидкости называется плеоцитозом и является признаком органического заболевания центральной нервной системы. Но многие заболевания могут протекать и при нормальном числе клеток. Плеоцитоз является слабым или легким при 5-50.106/л, умеренным – при 51-200.106/л, сильно выраженным – при 200-700.106/л, очень большим – свыше 1000.106/л

Подсчет эритроцитов ведут в камере Горяева традиционным методом либо в нативном ликворе вначале считают лейкоциты, а затем эритроциты.

Для изучения морфологии клеточных элементов ликвор центрифугируют при 1500об/мин в теч 10 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок переносят на обезжиренное стекло и высушивают в термостате при 40-50 оС.

Мазок цереброспинальной жидкости можно окрашивать различными способами. Одним из них является окраска по Розиной: мазки в течении 1-2 мин фиксируют метанолом, после чего окрашивают по Романовскому 6-12 мин в зависимости от выраженности цитоза. Краску смывают дистиллированной водой. При окраске по Возной мазок высушивают при комнатной температуре в течении суток, затем фиксируют метанолом 5 мин. Окрашивают азур-эозином, приготовленным для окраски мазков крови и разведенным в 5 раз в течении 1ч. Чем больше клеточных элементов в ликворе, особенно при наличии крови, тем больше надо дополнительно красить.

Для срочного цитологического исследования цереброспинальной жидкости применяют окраску по Алексееву. На нефиксированный мазок наносят 6-10 капель краски Романовского и через 30 сек приливают (не смывая краски) 12-20 капель дистиллированной воды, нагретой до 50-60 оС. Препарат оставляют на 3 мин. Смывают краску дистиллированной

Читайте также:  Почему гепард занесен в красную книгу

При микроскопировании чаще всего встечаются лимфоциты – малые (5-8 мкм) и средние (8-12 мкм), но могут быть и большие (12-15 мкм). Они имеют компактное ядро с глыбчатой структурой округлой формы или с небольшими вдавлениями в его контурах. Цитоплазма базофильна, часто видна только с одной стороны. В норме 1 мкл ликвора может содержать 1-3 лимфоцита. Но при вирусном энцефалите, туберкулезном и остром серозном менингите количество лимфоцитов значительно увеличивается. В условиях патологии преобладают средние и большие лимфоциты.

Также при длительно текущем нейросифилисе, туберкулезном менингите, рассеянном склерозе находят плазматические клетки – они более крупные 8-20 мкм в диаметре с четко очерченными границами. Ядра имеют сферическую форму, расположены эксцентрично, цитоплазма интенсивно базофильна, часто имеет перинуклеарную зону просветления и иногда содержит мелкие вакуоли по периферии клеток. Плазматические клетки являются одним из источников иммуноглобулинов класса G в ликворе.

В виде единичных клеток в спинномозговой жидкости встречаются моноциты – клетки диаметром 12-20 мкм с многообразным по форме и размеру ядром – бобовидным, подковообразным, дольчатым. Хроматин в ядре выглядит петлистым, складчатым. Окраска цитоплазмы интенсивно базофильная. В большом количестве моноциты обнаруживаются при хронических воспалительных процессах в оболочках мозга, после операций на головном мозге.

Макрофаги, клетки больших размеров от 20 до 60 мкм с небольшим ядром, появляются в центральной нервной системе при паренхиматозном или субарахноидальном кровоизлиянии. Значительное количество макрофагов в ликворе после операций говорит о хорошем прогнозе, полное их отсутствие является неблагоприятным признаком.

Наличие в ликворе нейтрофилов даже в минимальных количествах указывает на бывшую или имеющуюся воспалительную реакцию. Они могут быть при наличие свежей крови в ликворе и после операций на центральной нервной системе, при вирусных менингитах в первые дни заболевания. Появление нейтрофилов является признаком экссудации – реакции, связанной с бурным развитием некротических изменений в клетках нервной системы. Благодаря цитолитическим свойствам ликвора нейтрофилы подвергаются изменениям – лизируется ядро или лизируется цитоплазма и остается голое ядро. Присутствие измененных клеток говорит о затухании воспалительного процесса.

Также в цереброспинальной жидкости могут обнаруживаться эозинофилы и базофилы. При окрашивании азур-эозином в эозинофилах видна базофильная цитоплазма с кирпично-красной крупной, равномерной зернистостью. Ядро может быть двудольным или однодольным. Появление эозинофилов возможно при паразитарном заражении мозга, вирусном менингите, в жидкости кист опухолей. Обнаружение базофилов в ликворе является следствием местной клеточной иммунологической реакции центральной нервной системы.

Тучные клетки встречаются, главным образом, после хирургических вмешательств на центральную нервную систему. Они имеют вид клеток неправильной формы с короткими впячиваниями цитоплазмы или вытянутыми отростками. Ядро небольшое , вытянутой или овальной формы. Цитоплазма обильная с грубой базофильной неравномерной зернистостью.

Атипичные клетки – чаще всего являются клетками опухолей центральной нервной системы или ее оболочек. Это клетки эпендимы желудочков, паутинной оболочки, а также лимфоциты, моноциты, плазмоциты с изменениями ядра и цитоплазмы.

Зернистые шары или липофаги – включают в цитоплазму капли жира. В мазке имеют вид ячеистых структур с небольшим ядром. Обнаруживаются в патологической жидкости, полученной из мозговых кист, при распаде мозговой ткани.

Клетки опухолей центральной нервной системы обнаруживаются у больных с первичными и метастатическими опухолями мозга. Могут встретиться клетки астроцитомы, эпендиомы, меланомы, рака и др.опухолей. Характерным их признаком считается :

  • – наличие клеток, различных по размеру и форме в одном препарате,
  • – увеличенное число и размеры ядер,
  • -ядерный гиперхроматизм,
  • -анормальные митозы,
  • -хроматиновые фрагментации,
  • -цитоплазменная базофилия,
  • -появление скопления клеток.

Гигантская клетка опухоли при инденоме гипофиза

Изучение таких клеток требует специальных глубоких знаний.

Кристаллы гематоидина, холестерина, билирубина встречаются в содержимом кист. Элементы эхинококка – крючья, сколексы, обрывки хитиновой оболочки пузыря находят редко при эхинококкозе оболочек мозга.

Ссылка на основную публикацию
Adblock detector